艾滋病在阿米巴角膜炎的诊断与临床结果
这个分析的目的是帮助在阿米巴角膜炎的诊断与临床结果。
这个测试也有类似的文化敏感性和特异性,但提供了一个更快速的结果。
Acanthamoeba物种是独立生存的生物,可能发现广泛的环境中。
实时聚合酶链反应(PCR) / TaqMan DNA探针杂交
不同
虽然没有检测验证实验Acanthamoeba物种的DNA在隐形眼镜从无症状的成年人,这是可能的聚合酶链反应(PCR)检测无症状的殖民/污染,因此,测试应该不在无症状的个体被执行。
标本来源是必需的。
这个测试的首选标本是角膜刮或活检。
提交以下标本:只有1
样品类型:组织、新鲜
来源:眼
容器/管:无菌容器
样品数量:5 - 10毫米
收集产品说明:提交组织无菌容器1毫升无菌生理盐水,最小的重要媒体(MEM),或病毒传输媒体。
首选的石蜡包埋组织块:
供应:组织块容器(T553)
样品类型:Formalin-fixed,石蜡包埋组织块(FFPE)
来源:眼
容器/管:组织块
收集产品说明:提交一份FFPE组织块剪切和返回。
可接受的石蜡包埋组织块:
样品类型:Formalin-fixed,石蜡包埋组织块(FFPE)
来源:眼
容器/管:无菌容器为每个单独的截口(滚动)。
收集产品说明:执行切片法和五个单独的10微米部分做准备。每个部分(滚动)必须放置在一个单独的无菌容器提交。
样品类型:差点崩溃拭子,
来源:眼,眼,角膜
容器/管:无菌容器
样品数量:1毫升
收集产品说明:
1。收集角膜被刮削下使用手术刀或其它尖锐的设备来消除细胞的外层。
2。漂亮的收集装置1毫升无菌生理盐水,最小的重要媒体(MEM),或病毒传输媒体。
3所示。从集合中删除收集设备容器之前提交给实验室。
4所示。标本包含手术刀刀片将被取消。
附加信息:拭子不是首选标本这个测试,并可能产生假阴性结果。标本收集使用木制撑船拭子和钙alginate-tipped棉签将被取消。
样品类型:隐形眼镜
容器/管:无菌容器
样品数量:整个集合
收集产品说明:
1。整个隐形眼镜在无菌容器1毫升无菌生理盐水,病毒传输媒体,或基本媒体(MEM)。
2。左、右镜片必须提交单独使用多个无菌容器或在原来的隐形眼镜的情况。必须创建多个订单。
3所示。显示左或右的标本来源。
样品类型:隐形眼镜的情况下没有镜片
容器/管:无菌容器
样品数量:1毫升溶液或整个情况
附加信息:
1。根据类型的情况下提交,可能需要单独测试右和左室。必须创建多个订单。
2。显示左或右的标本来源。
如果不是电子订购,完成,打印和发送微生物测试请求(T244)标本。
活检组织:5毫米
屑:0.5毫升
隐形眼镜解决方案在隐形眼镜的情况下:1毫升
钙alginate-tipped擦洗木拭子运输含有凝胶拭子标本包含手术刀叶片无污点的幻灯片 | 拒绝 |
标本类型 | 温度 | 时间 | 特种集装箱 |
---|---|---|---|
不同 | 冷藏(首选) | 7天 | |
冻 | 7天 |
艾滋病在阿米巴角膜炎的诊断与临床结果
Acanthamoeba无处不在,生活无拘束的,微观的阿米巴原虫引起罕见,但严重的感染,皮肤、肺和中枢神经系统(CNS)。他们发现在全球水和土壤,可能通过吸入进入人体,污染的伤口,和隐形眼镜使用。多达24种组成18个基因型(T1-T18)描述,尽管大多数人类感染是由于基因型T4。考虑到他们在环境中广泛分布,许多人将会暴露Acanthamoeba在他们的一生中,但很少会生病的风险。
最常见的形式Acanthamoeba感染阿米巴角膜炎(AK)。感染主要发生在戴隐形眼镜的使用者由于镜片污染,清洁的解决方案,或存储情况。阿米巴原虫也可以进入角膜创伤后。AK党是一个痛苦的、亚急性角膜感染与广泛的疤痕,如果未经处理的失明。通常情况下应对治疗但复发是很常见的。相比,角膜感染、中枢神经系统的参与是罕见的,主要在免疫系统严重受损患者,如器官移植受者和艾滋病患者。中枢神经系统感染引起的也可能是相关的变形虫,Balamuthia mandrillaris。
正义与发展党通常是根据症状和临床疑似共焦眼科检查。确认感染角膜组织的显微镜检查确认的传统和文化,隐形眼镜或设备使用自来水琼脂板表面阿米巴原虫和细菌作为食物来源。不幸的是,它必须举行了7天的最大灵敏度。聚合酶链反应测定提供了一种更快速的结果与文化敏感性相似,因此,确认AK的临床诊断的首选方法。
负
一个积极的结果表明存在Acanthamoeba物种的DNA和符合活跃或近期感染。而积极的结果是高度特定疾病的指标,他们应该与症状,临床发现,和共焦眼科检查。
虽然这个试验的目的是检测感染症状Acanthamoeba这些独立生存的物种,广泛分布的微观环境中的阿米巴原虫可能污染无生命的物体,如隐形眼镜和案例。因此,它应该用于患者临床病史和眼部症状符合阿米巴角膜炎。
不充分的样本收集或储存不当可能无效的测试结果。
Acanthamoeba物种的DNA可能会检测到一个未知的适当治疗后一段时间。
以下试验验证数据支持使用这对临床试验测定。
物种包容性:
的Acanthamoeba聚合酶链反应(PCR)分析检测的20种不同的菌株Acanthamoeba导致人类疾病,包括基因型。
/诊断的敏感性和准确性Specificity-Fresh标本:
结果从该PCR试验检测的18 s rRNA基因Acanthamoeba物种相比,文化结果112联系/眼标本。12个标本的积极的文化,11被PCR检测(敏感性92%)。PCR也发现一个额外的2份阳性标本,这都是来自同一病人的临床诊断阿米巴角膜炎(AK),而98年标本负面文化和PCR(特异性为98%)。
/诊断的敏感性和准确性Specificity-Formalin-Fixed石蜡包埋标本:
24 formalin-fixed石蜡包埋组织块(FFPE)归档测试的Acanthamoeba物种PCR检测结果与病理(光显微镜)的诊断。十四的组织的形态学诊断acanthamebic角膜炎;其中,12被PCR阳性(敏感性86%)。十标本负组织病理学和PCR(特异性为100%)。
补充精度数据:
飙升的研究进行使用眼部材料传输媒体(隐形眼镜液,基本媒体),与新鲜组织和FFPE组织越来越多Acanthamoeba基因组DNA在50目标/制程的近似浓度。所有样本被蒙蔽的方式提取和测试。在50个目标/制程,100%的眼材料,新鲜,FFPE组织被PCR阳性。
分析灵敏度/检测极限:
——检测极限(LOD)确定连续稀释的讲究的Acanthamoeba囊肿(计算使用血细胞计数器)被认为是1囊肿/加工样品。
——建立LOD使用基因组DNA飙升到隐形眼镜解决方案/基本传输媒体1.26目标副本/制程。
——建立LOD使用基因组DNA飙升到6.5目标拷贝/毫升新鲜组织矩阵。
——建立LOD使用基因组DNA飙升到5.7 FFPE组织矩阵是目标拷贝/毫升。
分析特异性:
没有PCR信号获得47提取的细菌,病毒,寄生虫和真菌隔离来自相似的生物体或生物标本中常见测试。
精度:
定性的国米,intra-assay精度为100%。所有通道值在2周期的意思。
参考范围:
这个试验的参考范围是“消极”。PCR和文化上执行291隐形眼镜从无症状个人未能发现AcanthamoebaDNA或增长。
然而,PCR检测Acanthamoeba物种殖民由于广泛分布的独立生存的环境中的阿米巴,和PCR测试应该只被用于患者临床病史和眼部症状符合正义与发展党。
可报告范围:
这是一个定性测定,结果报告为有针对性的正面或负面的Acanthamoeba物种。
1。Trabelsi H, Dendana Sellami, et al:致病性独立生存的变形虫:流行病学和临床检查。中华医学杂志(巴黎)。2012年12月,60 (6):399 - 405
2。汤普森PP、Kowalski RP,小腿RMQ戈登YJ:验证实验室诊断的实时PCRAcanthamoeba角膜炎。中国Microbiol。2008年10月,46 (10):3232 - 3236
执行分析的罗氏LightCycler (LC) 480 II仪器后DNA提取的罗氏麦格纳纯或西门子组织制备系统。LC 480 II仪器是一个自动化仪器放大和显示器的发展目标核酸(扩增子)在每个周期的聚合酶链反应(PCR)。
PCR检测的DNA的目标是一种基因编码核小亚基核糖体18 s rRNA。
PCR混合包含一个特定的正向和反向引物Acanthamoeba物种模板放大和1 TaqMan探针(CY5)。CY5探测器包含一个荧光团(5 ')和冷却器(3 '端)附近;冷却器抑制荧光团的荧光信号探针时完好无损。在探测目标免疫印迹Acanthamoeba18 s rRNA,随后由DNA聚合酶降解5‘3’核酸外切酶活性,导致释放荧光团和生产检测荧光信号。Qvarnstrom Y, Visvesvara GS,斯R, da Silva AJ:多路实时PCR试验的同时检测Acanthamoebaspp,Balamuthia mandrillaris,Naegleria fowleri。中国Microbiol。2006年10月,44 (10):3589 - 3595;康纳利L, Anijeet D,亚历山大CL。描述性的持久Acanthamoeba角膜炎:唤起对这个复杂的眼部疾病。访问Microbiol。2019年11月28日;2 (3):acmi000084)
星期一到星期六
这个测试开发,其性能特征由梅奥诊所的方式与CLIA要求一致。这个测试没有被清除或得到美国食品和药物管理局的批准。
87798年