快速(定性)检测临床标本中水痘带状疱疹病毒DNA的快速检测
实时聚合酶链反应(PCR)/DNA探针杂交
水痘
带状疱疹
PCR(聚合酶链反应)
通过PCR(聚合酶链反应),CSF检测水疗菌病毒
VZV真皮
通过实时PCR检测VZV
通过实时PCR检测水痘带状疱疹病毒
毒甲菌病毒(VZV)
带状疱疹
变化
需要标本来源。
仅提交以下标本中的1个:
补给品:等分试管,5 mL(T465)
样品类型:体液
资料来源:脊柱,胸膜,腹膜,腹水,心包,羊膜或眼镜
容器/管:无菌容器
标本卷:0.5毫升
收集说明:不要离心。
补给品:
-culturette(BBL培养拭子)(T092)
-M4-RT(T605)
-bartels flextrans VTM-3毫升(T892)
-jiangsu VTM-3毫升(T891)
样品类型:拭子
资料来源:各种各样的;皮肤,眼睛,鼻或喉咙
容器/管:多型媒体(M4-RT)(T605)和ESWABS
收集说明:将拭子放回多种微生物介质(M4-RT [T605],M4或M5)中。
补给品:
-culturette(BBL培养拭子)(T092)
-M4-RT(T605)
-bartels flextrans VTM-3毫升(T892)
-jiangsu VTM-3毫升(T891)
样品类型:拭子
资料来源:生殖器子宫颈,阴道,尿道,肛门/直肠或其他生殖器来源
容器/管:多型媒体(M4-RT)(T605)和ESWABS
收集说明:将拭子放回多种微生物介质(M4-RT [T605],M4或M5)中。
样品类型:体液
资料来源:呼吸道;支气管洗涤,支气管肺泡灌洗,鼻咽抽吸或洗涤,痰液或气管抽吸物
容器/管:无菌容器
标本卷:1.5毫升
补给品:
-M4-RT(T605)
-bartels flextrans VTM-3毫升(T892)
-jiangsu VTM-3毫升(T891)
样品类型:组织
资料来源:大脑,结肠,肾脏,肝脏,肺等。
容器/管:
首选:多型媒体(M4-RT)(T605)
可接受:无菌盐水的无菌容器
标本卷:整个系列
收集说明:仅提交新鲜纸巾一个含有1毫升至2 mL无菌盐水或多型培养基的无菌容器(M4-RT [T605],M4或M5)
如果不以电子方式订购,请完成,打印并发送微生物学测试请求(T244)带试样。
体液,眼液或脊柱液:0.3 mL
呼吸标本:1毫升
纸巾:2 x 2毫米活检
拭子/组织 | 藻酸钙钉,木拭子或含有凝胶福尔马林固定和/或石蜡包埋的组织的棉签 |
标本类型 | 温度 | 时间 | 特殊容器 |
---|---|---|---|
变化 | 冷藏(首选) | 7天 | |
冷冻 | 7天 |
快速(定性)检测临床标本中水痘带状疱疹病毒DNA的快速检测
水痘带状疱疹病毒(VZV)引起水痘(水痘)和带状疱疹(带状疱疹)。VZV通常在10岁之前在正常儿童的真皮(水痘)上产生普遍的囊泡皮疹。在用VZV产生初次感染后,该病毒持续存在潜在的形式,并且可能在临床上(通常在50岁及以上的成年人中)引起单侧囊泡喷发,通常是皮肤分布(带状疱疹)。
消极的
在临床标本中检测Varicella-Zoster病毒(VZV)DNA的检测支持由于该病毒引起的感染的临床诊断。
在没有中枢神经系统疾病的患者的脑脊液中未检测到VZV DNA。
这种LightCycler PCR分析不会与其他疱疹病毒基因靶标(单纯疱疹病毒,巨细胞病毒,爱泼斯坦 - 巴尔病毒)产生阳性结果。
阴性结果并不排除水痘带领病毒(VZV)感染的可能性。
参考范围通常是“消极的“为此测定。该测定仅用于具有临床病史和症状与VZV感染一致的患者,必须在临床情况下进行解释。该测试不用于筛查无症状患者。
以下验证数据支持该测定法进行临床测试。
准确性/诊断灵敏度和特异性:
将LightCycler PCR(引导针对Varicella-Zoster病毒[VZV],Gene 29)与壳肠肠细胞培养物进行了比较,以检测253个皮肤标本的VZV。LightCycler PCR和壳体小丝细胞培养测定法对VZV的二十三个标本(9.1%)为阳性。另外21个标本专门产生VZV DNA。通过使用针对VZV另一个基因的引物确认PCR的结果,将这些差异标本作为真实阳性结果解析。重要的是,在某些情况下,没有通过壳体小瓶分析回收VZV,也未被LightCycler PCR检测到(特异性,100%)。在常规PCR和LightCycler PCR测试的100个脑脊液标本中,通过两种方法在49个样品中检测到VZV DNA。1仅通过常规PCR分析为阳性。两种技术都发现VZV DNA为五十个样品。
补充数据(尖峰研究):
为了补充上述数据,在检测极限(10-20个靶标/微晶)将各种类型的每种类型的30个负标本均匀。尖刺的标本以盲目的方式以及大约30个阴性标本(非标本)类型运行;90%至100%的峰值标本为正,100%的非标本为负
分析灵敏度/检测极限(LOD):
该测定法的LOD是样品基质中每个微氧化器的10至20个DNA靶拷贝。
分析特异性:
从27种细菌,病毒和真菌分离株的提取物中没有获得PCR信号,这些株可以在通常对该生物体进行测试或可能引起类似症状的位点发现为正常菌群。
精确:
Inter -aysay精度为100%,弥赛内精度为97%。
可报告范围:
该测试是一种定性测定,结果据报道为靶向的VZV DNA为阴性或阳性。
1. Cinque P,Bossolasco S,Vago L等:水痘带状疱疹感染人类免疫缺陷病毒的患者脑脊液中的病毒(VZV)DNA:中枢神经系统的VZV疾病还是VZV感染的亚临床重新激活?Clin Infect Dis 1997; 25(3):634-639
2. Brown M,Scarborough M,Brink N等:水痘带状疱疹HIV感染患者与病毒相关的神经系统疾病。INT J STD AIDS 2001; 12(2):79-83
3. Studahl M,Hagberg L,Rekabdar E,Bergstrom T:脑脊液中的疱疹病毒DNA检测:α-,β-和Gamma-Herpesviruses临床表现的差异。Scand J Infect Dis 2000; 32(3):237-248
4. ITEN A,CHATELARD P,VUADENS P等:脑脊液PCR对HIV感染患者的治疗的影响水痘带状疱疹中枢神经系统的病毒感染。J Neurovirol 1999; 5(2):172-180
5. Sauerbrei A:Varicella -Zoster病毒感染 - 抗病毒疗法和诊断。GMS Infect DIS 2016 2月17日; 4:Doc01 doi:10.3205/id000019
6. Sauerbrei A:诊断,抗病毒药疗法和预防性水痘带状疱疹病毒感染。Eur J Clin Microbiol Infect DIS 2016年5月; 35(5):723-734 doi:10.1007/s10096-016-2605-0
病毒核酸是通过临床标本的Magna Pure Automated仪器(Roche Applied Science)提取的。针对靶DNA的引物(SS DNA结合蛋白:基因29)产生202 bp扩增子。LightCycler仪器通过荧光放大和监视PCR循环过程中退火步骤后的靶核酸序列的发展。这是一个自动化的PCR系统,它可以快速检测(30-40分钟)扩增子开发,尽管毛细管比色具有严格的空气控制温度循环。放大产物的检测是基于荧光共振能量转移(FRET)杂交探针与供体荧光团荧光素在3'端上受到外部光源的激发,并发出了由第二个杂交探针吸收的光,并用第二次杂交探针吸收了光源。受体荧光团,LC-RED 640,在5'端。然后,受体荧光团发出了不同波长的光,可以用与特定PCR产物数量成正比的信号进行测量。PCR扩增后,进行熔融曲线分析。从45度C开始,热室中的温度缓慢升高至80度C,并以频繁的间隔测量荧光。通过使用LightCycler软件来完成PCR扩增和探针熔化曲线的分析。(Dhiman N,Wright PA,Espy MJ等:来自相同解剖位置的聚合酶链反应对单纯疱疹和水痘带状疱疹病毒的同时检测。诊断微生物感染2011年8月; 70(4):538-540 doi:10.1016/j.diagmicrobio.2011.03.014;Espy MJ,Teo R,Ross TK等:诊断水痘-带状管LightCycler PCR在临床实验室中的病毒感染。J Clin Microbiol 2000; 38 [9]:3187-3189)
星期一至周六
该测试是开发的,其性能特征由Mayo诊所以与CLIA要求一致的方式确定。该测试尚未得到美国食品药品监督管理局的清除或批准。
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