评估病人急性的嫌疑无形体病或埃立克体病毒传染
实时聚合酶链反应(PCR) / DNA探针杂交
大肠chaffeensis
埃立克体属chaffeensis
埃立克体属ewingii
埃立克体属muris-like (EML)
公顷(人类无形体病)
他(人类埃立克体病毒传染)
近半年(人粒细胞无形体病)
引起的HGE(埃立克体病毒传染)
HME(人类单核细胞的埃立克体病毒传染)
人类无形体病(公顷)
人类埃立克体病毒传染(他)
人粒细胞无形体病(无)
人粒细胞埃立克体病毒传染(的HGE)
人类单核细胞的埃立克体病毒传染(HME)
Ehrlicha犬属
红孢子虫属phagocytophilum
埃立克体属缪里斯eauclairensis
全血EDTA
容器/管:薰衣草(EDTA)
样品数量:1毫升
0.3毫升
严重溶血 | 好吧 |
总脂血 | 拒绝 |
标本类型 | 温度 | 时间 | 特种集装箱 |
---|---|---|---|
全血EDTA | 冷藏(首选) | 7天 |
评估病人急性的嫌疑无形体病或埃立克体病毒传染
埃立克体病毒传染和无形体病是一群新兴人畜共患蜱传播的感染引起的埃立克体属和红孢子虫属分别的物种。这些专性细胞内,革兰氏阴性立克次体的有机体感染白细胞和人类造成潜在的严重发热性疾病。
人粒细胞无形体病(HA)引起的红孢子虫属phagocytophilum,这是通过受感染的咬Ixodes蜱虫的物种。的流行病学在美国感染莱姆病的很像(引起通过包柔氏螺旋体burgdorferi)和巴贝西虫病(主要是由引起的巴贝西虫microti蜱虫),都有相同的向量。HA上最为流行中西部地区和其他地区的美国莱姆病的流行。
人类单核细胞的埃立克体病毒传染(他)所致埃立克体属chaffeensis,孤星蜱传播的,科学家americanum。大多数情况下,他从东南部已报告和美国的中南部地区。E ewingii犬粒细胞埃立克体病毒传染的,已知的原因,有时也会引起一个09在人类疾病。临床特性和实验室异常的相似E chaffeensis感染和抗体E ewingii和当前血清学的化验检测交叉反应的抗体来E chaffeensis。
最近,梅奥诊所实验室发现的新物yabo208种埃立克体属患者接触蜱虫在威斯康辛州和明尼苏达州。这种生物是最密切相关的E缪里斯,因此被称为E缪里斯-如代理或EMLA。这个名字E缪里斯eauclairensis最近提出的城市后第一个案例。E缪里斯eauclairensis埃立克体病毒传染,因为会导致类似的疾病E chaffeensis和E ewingii,并在宿主免疫功能不全的可能会引起更严重的疾病。
大多数情况下无形体病和埃立克体病毒传染的亚临床或轻微,但感染可以在一些人严重,危及生命。发热、疲劳、倦怠、头痛、和其他流感样症状,包括肌痛、关节痛,恶心,最常发生。中枢神经系统的参与可能导致癫痫发作和昏迷。
诊断可能是困难的因为病人的临床过程通常是温和的和非特异性。这症状复杂很容易混淆与其他疾病如流感,或其他蜱传播的人畜共患病如莱姆病,巴贝西虫病,落基山斑疹热。线索后埃立克体病毒传染的急性发热病人的诊断蜱虫接触包括实验室发现的白血球减少症或血小板减少症和血清转氨酶水平升高。然而,尽管这些异常的实验室发现经常看到的,它们不是具体。很少,intra-granulocytic或单核细胞的桑椹胚可能是外周血涂片观察,但这并不是一个可靠的诊断意味着人类埃立克体病毒传染或无形体病的病例。
明确的诊断通常是通过聚合酶链反应和血清学的方法。血清学检查以确认为主要目的,通过展示一个在特定的抗体滴度4倍上升或下降埃立克体属物种或红孢子虫属抗原。目前没有商用特定的血清学的检测E缪里斯eauclairensis,但大埃立克体属物种血清学检测。
PCR技术允许直接从病人的全血检测pathogen-specific DNA是首选方法检测在疾病的急性期。梅奥PCR检测能够检测和区分phagocytophilum、E chaffeensis E ewingii,和缪里斯eauclairensis。
重要的是要注意,并发感染phagocytophilum,,伯氏疏螺旋体和巴贝西虫microti并不少见,这些生物共享相同的吗Ixodes蜱虫向量,并为这些病原体可能显示额外的测试。
负
积极的结果表明存在特定的DNA埃立克体属chaffeensis E ewingii,E缪里斯eauclairensis生物体,或红孢子虫属phagocytophilum和支持埃立克体病毒传染或无形体病的诊断。
负面结果表明没有检测到这些4病原体标本的DNA,但不排除这些生物体的存在或活动或最近的疾病。
由于DNAE ewingii的区别吗E犬属通过这种快速PCR鉴定,一个积极的结果E ewingii /犬属表明DNA的存在这两种2生物。
这个试验不应被用于筛查无症状的个体,并只能用于测试患者的症状和体征埃立克体病毒传染或无形体病。
阴性结果并不表明没有疾病。
标本画不足或不当储存或运输条件会使测试结果。
这个测试可以检测的DNA犬埃立克体属(据报道,导致无症状感染仅在委内瑞拉)。
这PCR测试没有检测的DNA立克次氏体(原埃立克体属)sennetsu,哪一个据报道引发罕见mononucleosis-like疾病在人类(在日本和马来西亚)。
下面的验证数据支持使用这个分析临床测试。
精度/诊断的敏感性和特异性:
结果从这个实时PCR测定LightCycler (LC PCR)相比,使用常规PCR分析生成的红孢子虫属phagocytophilum127年独特,存档全血标本(99年26正面和负面标本常规PCR)。使用常规PCR作为金标准,检测的诊断敏感性和特异性红孢子虫属phagocytophilum是100%。此外,12埃立克体属chaffeensis隔离和2埃立克体属ewingii隔离(参考菌株)是由LC PCR检测,是积极的。
补充数据激增(研究):
补充上述数据,30 -全血样品飙升了红孢子虫属phagocytophilum积极控制质粒检测极限(LoD)(10张/ microL)。30飙升标本蒙蔽的方式以及运行30 - (nonspiked)标本。100%的飙升标本是积极的,100%的nonspiked标本都是负面的。
分析灵敏度/检测极限(LoD):
较低的LoD的EDTA血液中每个物种的分析如下:
- - - - - -红孢子虫属phagocytophilum =大约10每微升的目标
- - - - - -埃立克体属chaffeensis=大约5目标每微升
- - - - - -埃立克体属缪里斯eauclairensis=大约每微升100的目标
- - - - - -犬埃立克体属ewingii /=大约10每微升的目标
分析特异性:
没有获得PCR信号提取的生物:单纯疱疹病毒,巴尔病毒,金黄色葡萄球菌、葡萄球菌epidermidis酿脓链球菌,大肠杆菌,绿脓杆菌,巴尔通氏体属henselas,巴尔通氏体属缅甸Ricketssia伤寒,Ricketssia rickettsii,刚地弓形虫,巴贝西虫microti锰、巴贝西虫microti写明ATCC 53899,Borellia burgdorferi写明ATCC 51990,埃立克体属risticii写明ATCC vr - 986,红孢子虫属边际。核酸提取的积极结果2犬埃立克体属(病人紧张和压力写明ATCC crl - 10390株),熔化温度(Tm)的49.5摄氏度(区别埃立克体属ewingii)。积极的峰值还指出了融化埃立克体属缪里斯(写明ATCC vr - 1411),但Tm(55.24摄氏度)是很容易区别的Tm目标生物。
精度:
Interassay精度为97%,intra-assay精度为96%。
参考范围:
五十全血标本正常献血者进行了测试,发现是负的目标或检测埃立克体属和红孢子虫属物种。
可报告范围:
这是一个定性的分析,并报告结果的消极或积极的目标埃立克体属/红孢子虫属物种(阳性红孢子虫属phagocytophilum,埃立克体属chaffeensis,埃立克体属缪里斯eauclairensis或埃立克体属ewingii)。
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从血液中的病原体核酸提取使用自动麦格纳纯LC系统。然后转移到提取放大96 - Lightcycler 480道菜。480 LightCycler自动化仪表放大和显示器的发展目标核酸扩增子每次循环后PCR。groEL DNA PCR检测目标,热休克蛋白基因开放阅读框的部分操纵子(groEL),出席一个频率1复制/生物病原物种红孢子虫属和埃立克体属。一个特定的DNA碱基对目标序列由PCR扩增。扩增子的检测是基于荧光共振能量转移(FRET),利用供体荧光团的杂交探针,荧光素,3”结束,第二个杂交探针受体荧光团,LC-Red 640 5的结束。当目标扩增子存在,640年LC-Red发出特定波长可衡量的、可量化的光信号。存在的特定生物核酸可能证实了扩增子的执行一个融化曲线分析。融化的使用特性曲线分析,分析引物和特定杂交探针可以检测和区分红孢子虫属phagocytophilum,埃立克体病毒传染chaffeensis,埃立克体属缪里斯eauclairensis,和埃立克体属ewingii /犬属。由于融化曲线的附近埃立克体属ewingii和犬埃立克体属,这个试验不能区分这两个生物。(Cockerill FR, Uhl FR: Applications and challenges of real-time PCR for the clinical microbiology laboratory.在快速实时PCR循环。编辑通过U Reischl C Wittwer F Cockerill。施普林格,纽约,2002年)
星期一到星期六
这个测试开发,其性能特征由梅奥诊所的方式与CLIA要求一致。这个测试没有被清除或得到美国食品和药物管理局的批准。
87798年