艾滋病诊断肠病毒感染
实时聚合酶链反应(PCR) /核糖核酸探针杂交
柯萨基病毒
柯萨基病毒一
柯萨奇病毒B
艾柯病毒
肠病毒
肠病毒(柯萨基病毒和艾柯病毒)
手,脚,口病
等离子体EDTA
提交原始临床样本为肠道病毒PCR(不是文化隔离)。这个测试将检测肠病毒,但不会区分病毒在这个家庭或提供血清学分型的信息。
收集容器/管:薰衣草(EDTA)
提交集装箱/管:螺旋帽、无菌容器
样品数量:1毫升
收集产品说明:旋转迅速下降。
如果不是电子订购,完成,打印和发送微生物测试请求(T244)标本。
0.3毫升
严重溶血 | 拒绝 |
标本类型 | 温度 | 时间 | 特种集装箱 |
---|---|---|---|
等离子体EDTA | 冷藏(首选) | 7天 | |
冻 | 7天 |
艾滋病诊断肠病毒感染
肠道病毒是积极意义RNA病毒引起的家庭。这些病毒最初是由血清型分类作为脊髓灰质炎病毒(3类),艾柯病毒(31日类型,包括类型22日和23日,现在分为parechoviruses),柯萨基病毒(类型)23日,柯萨奇病毒B(6类)。然而,基因组研究已经证明,有明显的重叠在不同血清型的生物学特性,最近,孤立的肠道病毒现在用连续数字命名(如EV68, EV69)。
正常的肠病毒复制的网站是胃肠道感染通常是亚临床的地方。然而,在部分情况下,病毒扩散到其他器官,引起全身表现,包括轻微的呼吸道疾病(如感冒);结膜炎;手、足、口病;无菌性脑膜炎;心肌炎;和急性弛缓性麻痹。总的来说,肠道病毒是最常见的导致儿童上呼吸道疾病。此外,肠道病毒是最常见的中枢神经系统(CNS)疾病的原因;他们几乎占所有病毒恢复脊髓液的文化。分化的肠道病毒与其他病毒和细菌,引起中枢神经系统疾病是重要的适当的医疗管理这些病人。
传统的细胞培养方法需要6天,平均而言,对肠道病毒检测。相比之下,实时PCR可以当天检测。肠病毒核酸的检测PCR也最敏感的诊断方法诊断中枢神经系统感染这些病毒引起的。
负
一个积极的结果表明样品中肠道病毒RNA的存在。
消极的结果并不排除肠病毒感染的可能性。这种试验可能检测到病毒从各种各样的标本类型在无症状的个体。这个试验应该只用于患者临床病史和症状符合肠病毒感染,而且必须解释的临床图片。这个测试不应该用于屏幕无症状的患者。
精度/诊断敏感性和特异性:
我们比较通用的肠道病毒检测脊髓液常规管细胞培养(MCR-5)和LightCycler PCR。检测的715份标本中,肠道病毒65年发现传统的细胞培养和82年(9%)由LightCycler PCR (11%)。82年22(27%)只积极通过PCR;然而,65年只有5只(8%)正由传统的细胞培养。
补充数据激增(研究):
补充上面的数据中,30或更多的负样本的每个标本类型(脑脊液/无菌体液,真皮/眼/直肠拭子,等离子体,和上、下呼吸道标本)与肠病毒文化上升控制在大约10到50目标/制程(近似检测极限)。飙升的标本被蒙蔽的方式运行以及负(nonspiked)标本的标本类型。飙升的标本,是积极的,97%至100%和100%的nonspiked标本都是负面的。总共489飙升和nonspiked标本进行测试。
分析包容性:
试验检测到的所有64个成员国肠病毒面板,包括柯萨基病毒、脊髓灰质炎病毒、艾柯病毒和其他肠道病毒。
分析特异性/检测极限(LoD):
这个分析的较低的LoD大约是10至50 RNA目标副本/制程。这是在所有标本类型确认接受这个试验。
特异性:
试验没有crossreact包含其他RNA-containing病毒特异性面板(鼻病毒;呼肠孤病毒;A型和B型流感病毒;呼吸道合胞体病毒;和副流感病毒病毒)和病毒(单纯疱疹,巴尔病毒、水痘一带状疱疹病毒和巨细胞病毒)。
可报告范围:
这是一个定性分析和报告结果的消极或积极的有针对性的肠道病毒RNA。
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3所示。Furione M, Zavattoni M•加蒂M, et al:快速检测enteroviral RNA的无菌性脑膜炎患者脑脊液(CSF)的反向transcription-nested聚合酶链反应。新Microbiol 1998; 21 (4): 343 - 351
这个实时逆转录laboratory-developed PCR检测,病毒核酸提取标本使用麦格纳纯自动化仪表(罗氏应用科学),其次是放大和检测罗氏LightCycler 2.0乐器。这个PCR试验优化多元蛋白质地区探测到目标的序列。引物扩增193 bp的产品。
肠病毒基因组RNA转录首次cDNA逆转录酶,其次是放大的cDNA产品。T他LightCycler仪器可以迅速(30 - 40分钟)通过严格检测扩增子发展空气缸温度循环在毛细管比色皿。放大产品的检测是基于荧光共振能量转移(FRET)原则。担心产品的检测,与供体荧光团杂交探针,荧光素,在3’端是由外部光源和发光兴奋所吸收的第二个杂交探针受体荧光团,LC-Red 640年在5 '端。受体荧光团然后发出不同波长的光,可以测量信号正比于特定PCR产品的数量。烦恼(后续生产检测荧光信号)仅发生在探测器特别退火到目标序列的扩增子。
融化曲线分析是进行PCR扩增和检测阶段的分析,因为它提供了更大的敏感性比放大阶段和维护高特异性。
发生融化阶段的分析如下:
从45摄氏度,探测器可以绑定到放大产品,热室然后慢慢的温度提高到80摄氏度和荧光测量来确定点失去一半的荧光探针是变性(即“融化”)的目标。这就是所谓的熔化温度(Tm)的病毒。分析PCR扩增和探针融化曲线是通过使用LightCycler软件来完成的。(Cockerill FR三世,Uhl JR:应用程序和实时PCR临床微生物实验室的挑战。在快速循环实时PCR方法和应用。由U Reischl,编辑等。
周一到周日
这个测试开发,其性能特征由梅奥诊所的方式与CLIA要求一致。这个测试没有被清除或得到美国食品和药物管理局的批准。
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