测试ID: SHPV
人类乳头瘤病毒(HPV) DNA检测与基因分型，高危型PCR, SurePath，变化

检测与宫颈癌发展相关的高危(HR)基因型

一种对有异常巴氏涂片结果的妇女进行分类的帮助

人乳头瘤病毒（HPV）-16和/或HPV-18的个体基因分型，如果存在

这个测试是不建议用于对涉嫌性虐待的评估。

人乳头瘤病毒（HPV）的持续感染是宫颈癌的主要原因。HPV的存在涉及全世界超过99％的宫颈癌，包括宫颈鳞癌和宫颈腺癌。在侵入性癌症的发展之前，HPV感染鳞状粘膜细胞和/或内膜的腺细胞，导致克隆膨胀和形态变化。虽然HPV感染的细胞仅限于其正常的解剖位置，但这些变化被归类为宫颈上皮内瘤周期（CIN）。形态学变化的严重程度和这些变化类似于侵入性癌的形态的程度用于“等级”CIN。一般来说，高级CIN更紧密地类似于内侵入性癌。HPV还可以感染血液生物区域的其他粘膜细胞，例如阴道粘膜，导致HPV相关的宫内前进瘤形成以及未涉及子宫颈本身的侵入性癌，尽管这不太常见。

人乳头瘤病毒是一种小型、无包膜的双链DNA病毒，基因组约为8000个核苷酸。有118多种不同类型的HPV，约40种不同的HPV可感染人类肛门生殖道粘膜。只有一小部分暴露于HPV的患者会发生CIN。在这些患者中，只有一小部分会进展为浸润性宫颈癌。HPV性传播感染极为常见，估计有75%的女性在某个时候接触过HPV。然而，几乎所有受感染的妇女都会产生有效的免疫反应，并在2年内清除感染，而不会产生任何长期的健康后果。高危HPV基因型（尤其是HPV-16和18）以及持续性HPV感染（例如，患者免疫系统不能随时间清除的感染）都与进展为高级别CIN和浸润性癌症的几率增加有关。

数据表明，某些HPV基因型(如HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68)被认为是宫颈癌及其前体病变发展的高危(HR)。此外，HPV 16型和18型被认为是与宫颈癌进展最密切相关的基因型。HPV-16是最具致癌性的，约60%的宫颈癌与HPV-16有关，而HPV-18约占宫颈癌的10% - 15%。

在发达国家患有宫颈癌筛查计划中，自20世纪50年代中期自20世纪50年代中期以前使用了PAP涂片，以形态学检测CIN，宫颈癌前体。由于宫颈癌显着降低了死亡率降低了死亡率，因为在许多情况下，可以在进入侵袭性癌之前进行治疗和消除（例如，通过局部切除）。虽然PAP涂片和其他液体的细胞学方法具有许多优点，但它们也有局限性：它们需要通过训练有素的细胞病理学家和误解可能发生的主观解释，因此类似于艾滋病毒相关的CIV的形态变化可能是由其他条件引起的（例如，炎症），PAP涂片不会在子宫颈/血管生物区域内的每种细胞均可能导致错误的负面结果。也许最重要的是，PAP涂片不会区分HPV基因型，这是对宫颈癌的进展的高或低风险的影响，并且它不会检测到非常早期的感染，这可能缺乏形态表型。

通过聚合酶链反应的核酸（DNA）测试已成为确定宫颈HPV感染的存在的标准的，无侵入性方法。适当地实施HPV的核酸试验5月1日）通过在30岁及以上患有正常细胞学的女性早期检测宫颈癌筛查计划的敏感性，2）减少了患者21例不必要的阴道镜检查和治疗的需要年龄较大的细胞学结果显示出明显显着意义的非典型鳞状细胞（ASC-US）。

最近的数据表明，HPV 16型和18型的个体基因分型可以帮助确定适当的随访检测，并对有可能发展为宫颈癌的女性进行分类。研究表明，在HPV-16和/或HPV-18阳性的女性中，CIN-2或更严重的绝对风险为11.4% (95% CI, 8.4%-14.8%)，而“其他”HR-HPV基因型阳性的女性为6.1% (95% CI, 4.9%-7.2%)， HR-HPV阴性的女性为0.8% (95% CI, 0.3%-1.5%)。美国阴道镜和宫颈病理学会(ASCCP)现在建议对HR-HPV阳性但常规细胞学/巴氏涂片阴性的女性进行HPV 16/18基因分型。HPV-16和/或-18阳性的女性可能需要进行阴道镜检查，而16和/或18基因型阴性的女性可能需要在12个月内进行细胞学和HR HPV检测(1)。

HPV基因型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68为阴性

阳性结果表明人类乳头瘤病毒(HPV) DNA的存在是由于以下1个或更多的基因型:16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68。

阴性结果表明目标基因型的HPV DNA缺失。

对于巴氏涂片结果未确定的非典型鳞状细胞(ASC-US)和高危型(HR) HPV阳性的患者，如果有临床需要，可考虑转到阴道镜检查。

对于30岁及以上的女性，具有负面的PAP涂片结果，但是对于HPV-16和/或HPV-18是阳性的，如果临床表明，考虑过镜镜检查的转诊。

对于30岁及以上的女性，巴氏涂片阴性，HR HPV检测阳性，但HPV-16和HPV-18阴性的，可以考虑12个月后进行细胞学和HR HPV检测重复检测。

cobas人乳头瘤病毒（HPV）检测是FDA批准用于在PreservCyt（ThinPrep）培养基中采集的宫颈/宫颈内膜样本。在介质中采集的其他样本类型（如阴道），如SurePath，不被视为FDA批准的来源；然而，梅奥诊所实验室已经按照CLIA规定完成了验证研究。yabo208

临床样本在SurePath培养基中长期保存(>14天)可能影响高风险(HR) HPV的检测，特别是当样本中核酸含量最初处于低浓度时。因此，样品采集后应尽快提交检测。

COBAS HPV试验检测高风险类型16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66和68的DNA。该测试没有检测到低的DNA风险HPV类型（例如，6,11,42,43,44），其与侵入性宫颈癌及其前体病变无关。低风险的HPV类型与非侵入性生殖器疣和喉乳头瘤症相关。

人乳头瘤病毒感染在人群中的流行程度可能会影响工作表现。当检测低流行率人群或无感染风险的个体时，阳性预测值降低。

HPV感染不是细胞学上高级别上皮内病变(HSIL)或宫颈高级别上皮内瘤变(CIN)的指标，也不表明会发生高级别上皮内病变(如HSIL或CIN2-3)或癌症。大多数感染1种或更多HR HPV类型的女性不会发展成CIN2-3或癌症。

HR HPV阴性并不排除患者未来发展为高级别上皮内病变(如HSIL或CIN2-3)或癌症的可能性。

为了评估罗氏cobas人乳头瘤病毒(HPV)检测的准确性，使用SurePath培养基中收集的宫颈/宫颈内膜和阴道样本，进行了针刺和比较试验的结合。在加标研究中，30份分析阴性临床样本(SurePath培养基中的宫颈/宫颈内膜或阴道基质)与AcroMetrix HPV阳性基因型对照(68型[n=10]， 16型[n=10]， 18型[n=10])加标，浓度高于检测限(LOD) 1倍。结果汇总如下表1所示:

表1。在SurePath培养基中使用加标宫颈/宫颈内膜样本验证罗氏cobas HPV检测的准确性。

源	积极的	负	协议
人乳头瘤病毒基因型68	10／10	0	100％
HPV基因型16	10／10	0	100％
HPV基因型18	10／10	0	100％

除了上述的加标研究外，在SurePath培养基中收集的临床样本（n=26）以及最初在外部实验室通过罗氏cobas HPV检测进行的检测均在梅奥临床实验室（MCL）以盲法进行。结果总结见下表2：yabo208

表2。罗氏cobas HPV在外部实验室和MCL检测的SurePath样本的比较。

		罗氏cobas 4800 -室外实验室
罗氏科巴斯4800-MCL		积极的	负	总计
	积极的	14	14	14
	负	2	10	12
	总计	16	10	26

协议:92.3% (74.7 - -99.0%)

参考范围:

通过Roche Cobas HPV测定测试在常规PAP涂片筛选中收集的宫颈/内泌疗样品（n = 27）和阴道样品（n = 22）。

49份标本(100%)巴氏涂片阴性，罗氏cobas HPV 4800阴性。

罗氏cobas HPV检测的参考范围为阴性。

LOD（分析灵敏度）：

为了评估Roche cobas HPV检测的分析敏感性，在SurePath介质中创建了宫颈/宫颈内/阴道标本池。使用3个AcroMetrix HPV基因型对照（感染HPV基因型16、18或68的细胞系）中的每一个，在高起始浓度下加入池。对含有细胞的分析物阴性样品进行连续稀释，以实现分析物稀释至消光点。对每个稀释液进行至少6次重复试验，包括低于预测LOD 1次稀释的小组成员。LOD被确定为最高稀释度，其中6个重复中有6个为阳性。

Roche cobas HPV基因型16、18和“Other”高危HPV感染细胞在SurePath培养基中的LOD分别为50细胞/mL、1250细胞/mL和250细胞/mL。

分析特异性:

制造商已经对细菌、真菌和病毒进行了全面的特异性检测，包括那些在女性泌尿生殖道常见的细菌、真菌和病毒。此外，用cobas HPV检测几种低风险或未确定风险的HPV类型，以评估分析特异性。结果表明，这些微生物均未干扰hpv31、HPV16和HPV18的检测，也未产生高危HPV阴性标本的假阳性结果

样品稳定性:

使用峰值研究和临床样本评估SurePath样本（宫颈/宫颈和阴道）在环境温度（18-24℃）下的稳定性。以下表3和表4总结了这些结果：

表3.占用acrometrix阳性基因型对照（68,16或18）尖刺的负静止样品。将样品保持在环境温度下14天。

	类型68 - 5000细胞/毫升	类型16- 5000细胞/毫升	类型18岁 5000细胞/毫升
日	交叉点	交叉点	交叉点
0	31.6	31.8	36.7
7	32.5	31.4	36.6
14	34.2	31.9	39.2
平均的	32.3	31.7	37.5
%的简历	4.03	0.83	3.93

除了上述的峰值研究外，在外部实验室SurePath介质中收集的临床样本在环境温度下保存14天，并通过罗氏cobas HPV检测方法进行检测。

表4。在外部实验室收集的阳性SurePath汇总患者材料在环境温度下保存，并在14天内进行测试。

	患者的基因型 “其他人力资源HPV”	患者的基因型 HPV-16	患者的基因型 HPV-18
日	交叉点	交叉点	交叉点
0	37.2	27.5	29.6
7	36.4	28.7	30.4
14	37.4	28.9	29.8
平均的	37	28.4	29.9
%的简历	1.43	2.66	1.39

1.Saslow D，Solomon D，Lawson HW等：美国癌症学会，美国阴道镜和宫颈病理学会，以及美国临床病理学学会宫颈癌预防和早期检测筛查指南。低生殖道疾病。2012;16(3):175-204. 内政部：10.1097/LGT.0b013e31824ca9d5。

2.Walboomers JM、Jacobs MV、Manos MM等：人乳头瘤病毒是全世界侵袭性宫颈癌的必要原因。J Patrol。1999;189:12-19. 内政部：10.1002/（SICI）1096-9896（199909）189:1

3.人乳头瘤病毒基因型在浸润性宫颈癌中的归因:一项回顾性横断面研究。柳叶刀杂志。2010;11:1048 - 1056。doi: 10.1016 / s1470 - 2045(10) 70230 - 8。

4. Wright TC JR，Stoler MH，Sharma A等：评估HPV-16和HPV-18基因分型，用于高风险HPV阳性，细胞学阴性结果的妇女的分类。AM J Clin Pathol。2011年10月; 136（4）：578-586。DOI：10.1309 / AJCPTUS5EXAS6DKZ。

5.Gilbert L，Oates E，Ratnam S：宫颈标本在SurePath培养基中的稳定性，用于罗氏cobas 4800检测HPV。临床微生物学杂志。2013年10月；51(10):3412-3414. 内政部：10.1128/JCM.01391-13