测试ID: HPVP
人乳头瘤病毒(HPV) DNA检测与基因分型，高危型PCR与巴氏涂片反射，薄prep，变化

筛查与宫颈癌发展相关的高危人乳头瘤病毒感染

如果存在HPV-16和/或HPV-18的个体基因分型

这个测试是不建议用于对涉嫌性虐待的评估。

这个测试是不用于接受子宫切除术的妇女。

这个测试是不用于与临床医生使用宫颈刷或抹刀收集的样本一起使用，并将这些样本放置在宫颈抹片薄片试验PreservCyt溶液中。

这个测试是不用于在没有高度宫颈发育不良的情况下，用于确定是否需要治疗(即宫颈切除或消融治疗)。根据目前的实践指南，HPV16/18阳性的患者应仔细监测高度宫颈发育不良的发展。

当要求进行这项检测时，将通过聚合酶链反应(PCR)进行人类乳头瘤病毒(HPV)基因分型。如果患者年龄>或=25岁，PCR分型的HPV为其他高危型阳性，而16型和18型阴性，则需要进行HPV细胞学反射试验。

人乳头瘤病毒(HPV)持续感染是导致宫颈癌的主要原因。全世界99%以上的宫颈癌都与人乳头瘤病毒有关，包括宫颈癌鳞状细胞癌和宫颈癌腺癌。在侵袭性癌症发展之前，HPV感染宫颈内的鳞状黏膜细胞和/或腺细胞，导致克隆性扩张和形态改变。当hpv感染的细胞局限于其正常的解剖位置时，这些改变被归类为宫颈上皮内瘤变(CIN)。形态学改变的严重程度和这些改变与浸润性癌形态学相似的程度被用来“分级”CIN。一般来说，高级别CIN在形态学上更接近浸润性癌。HPV也可以感染肛门生殖器区域的其他粘膜细胞，如阴道粘膜，导致HPV相关的上皮内瘤变以及不涉及宫颈本身的浸润性癌的发展，尽管这种情况不太常见。

HPV是一种小型、无包膜、双链DNA病毒，基因组约有8000个核苷酸。人类乳头状瘤病毒有118种不同的类型，其中大约40种不同的乳头状瘤病毒可以感染人类肛门生殖器粘膜。接触HPV的患者中只有非常小的比例会发生CIN。在发生CIN的患者中，只有一小部分会发展为浸润性宫颈癌。HPV性传播感染极为常见，估计多达75%的女性在某些时候暴露于HPV。然而，几乎所有受感染的妇女都会产生有效的免疫反应，并在两年内清除感染，而不会产生任何长期的健康后果。高危HPV基因型(尤其是HPV-16和18)以及持续性HPV感染(例如，随着时间的推移，患者免疫系统未清除的感染)都与进展为高级别CIN和浸润性癌症的机会增加有关。

数据表明，某些HPV基因型(如HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68)被认为是宫颈癌及其前体病变发展的高危(HR)。此外，HPV 16型和18型被认为是与宫颈癌进展最密切相关的基因型。HPV-16是最具致癌性的，约60%的宫颈癌与HPV-16有关，而HPV-18约占宫颈癌的10% - 15%。

在有宫颈癌筛查项目的发达国家，巴氏涂片从20世纪50年代中期开始作为形态学检测CIN(宫颈癌的前体)的主要工具。巴氏涂片筛查显著降低了宫颈癌的死亡率，因为在许多情况下，CIN可以在发展为侵袭性癌之前得到治疗和消除(如通过局部切除)。虽然巴氏涂片和其他液体细胞学方法有许多优点，但它们也有局限性:它们需要由一个训练有素的cytopathologist主观解释,会发生误解,类似艾滋病CIN的形态学变化可能是由于其他条件(如炎症),子宫颈抹片检查不样例宫颈癌/肛门-生殖器区域内每一个细胞都可能导致错误的结果。也许最重要的是，巴氏涂片不能区分宫颈癌进展风险高或低的HPV基因型，也不能检测到可能缺乏形态学表型的早期感染。

通过聚合酶链反应(PCR)进行核酸(DNA)检测已经成为一种标准的、无创的检测宫颈HPV感染的方法。正确实施HPV核酸检测可能:

1.通过在细胞学正常的30岁及以上妇女中及早发现高危病变，提高宫颈癌筛查方案的敏感性

2.减少对21岁及以上细胞学结果显示意义不明的非典型鳞状细胞患者不必要的阴道镜检查和治疗的需要(ASC-US)

数据表明，HPV 16型和18型的个体基因分型有助于确定适当的后续检测，并对有可能发展为宫颈癌的女性进行分类。研究表明，在HPV-16和/或HPV-18阳性的女性中，CIN-2或更严重的绝对风险为11.4% (95% CI, 8.4%-14.8%)，而“其他”HR-HPV基因型阳性的女性为6.1% (95% CI, 4.9%-7.2%)， HR-HPV阴性的女性为0.8% (95% CI, 0.3%-1.5%)。美国阴道镜和宫颈病理学会(ASCCP)现在建议对HR-HPV阳性但常规细胞学/巴氏涂片阴性的女性进行HPV 16/18基因分型。HPV-16和/或-18阳性的女性可能需要进行阴道镜检查，而16和/或18基因型阴性的女性可能需要在12个月内重复细胞学检查和HR-HPV检测。

最近，美国食品和药物管理局(FDA)批准罗氏cobas HPV检测用于ThinPrep/PreservCyt培养基中收集的宫颈和宫颈内膜样本的初级筛查。此外，患者接受HPV检测的年龄从30岁下降到25岁。

人乳头瘤病毒(HPV)基因型聚合酶链反应(PCR): HPV基因型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68均为阴性

薄敷巴氏试验:评估满意。无上皮内病变或恶性肿瘤。

人乳头瘤病毒基因分型聚合酶链反应:

阳性结果表明人类乳头瘤病毒(HPV) DNA的存在是由于以下1个或更多的基因型:16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68。

阴性结果表明目标基因型的HPV DNA缺失。

对于巴氏涂片结果未确定的非典型鳞状细胞(ASC-US)和高危(HR)-HPV阳性的患者，如果有临床需要，可考虑转到阴道镜检查。

对于25岁及以上的HPV-16和/或HPV-18阳性，但巴氏涂片阴性的女性，如果临床有需要，考虑转介阴道镜检查。

细胞学:

使用Bethesda系统(TBS)定义的标准报告。

cobas人乳头瘤病毒(HPV)检测被fda批准用于在PreservCyt (ThinPrep)培养基中收集的宫颈和宫颈内样本。不能通过cobas HPV检测进行阴道来源的初步筛查。

cobas HPV检测检测高危型16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68的DNA。该检测不能检测HPV低风险类型的DNA(如6、11、42、43、44)，因为这些类型与宫颈癌及其前体病变无关。

人乳头瘤病毒感染在人群中的流行程度可能会影响工作表现。当检测低流行率人群或无感染风险的个体时，阳性预测值降低。

HPV感染不是细胞学上高级别上皮内病变(HSIL)或潜在的高级别宫颈上皮内瘤变(CIN)的指标，也不意味着会发生CIN2-3或癌症。大多数感染1种或更多高危(HR)-HPV型的女性不会发展成CIN2-3或癌症。

HR-HPV阴性结果不排除未来细胞学HSIL或潜在CIN2-3或癌症的可能性。

宫颈标本常可见全血呈粉红色或浅棕色。这些标本在cobas 4800系统上正常处理。如果PreservCyt溶液中全血浓度超过1.5%(暗红色或棕色)，则有可能获得无效或假阴性结果。

hpv阴性的宫颈癌确实发生在罕见的情况下。而且，没有癌症筛查是100%敏感的。在仔细考虑cobas HPV检测标签所列的性能特征以及专业指南的建议后，方可使用该仪器进行原发性子宫颈癌筛查。

该检测方法的使用尚未被评估为有过手术或切除治疗、子宫切除术、怀孕或有其他危险因素(如HIV+、免疫功能低下、性传播感染史)的妇女的管理。

其他潜在变量的影响，如阴道分泌物、使用卫生棉条、冲洗等，和标本收集的变量尚未评估。

cobas HPV检测性能尚未通过使用冰醋酸去除红细胞后的PreservCyt标本验证。在HPV检测前对PreservCyt标本进行任何这样的处理都会使cobas HPV检测结果无效。

cobas HPV检测性能尚未通过手工填充超过主瓶最大填充线的PreservCyt标本验证。在初始样品中添加了任何不同液体体积的稀准备瓶不应提交检测。

聚合酶链反应抑制剂的存在可能导致假阴性或无效的结果。

准确性:

为了评估罗氏cobas人乳头瘤病毒(HPV)检测的准确性，前瞻性收集的宫颈/宫颈标本(n=753)在薄prep培养基中同时进行Digene hc2 (Qiagen)和罗氏cobas HPV检测。

表1。罗氏cobas 4800 HPV检测与Digene hc2检测的比较(n=753)

		Digene hc2
		积极的	负	总计
罗氏公司 cobas 4800	积极的	353	(26日)	379
	负	42 (b)	332	374
	总计	395	358	753

整体协议:91.0% (88.7-92.8%)

a.第三次fda批准的高危(HR)-HPV检测结果显示，4个样本阳性，22个样本阴性。

b.在第三次fda批准的HR-HPV检测中，13个样本呈阳性，29个呈阴性。

除了比较上述准确性数据，罗氏cobas HPV检测还与阴道镜(组织活检)的结果进行了比较(n=350)，临床终点宫颈上皮内瘤变(CIN)2或更糟被认为是阳性。结果总结如下表2。

表2。罗氏cobas 4800 HPV检测与宫颈活检的比较，在350个样本中，细胞学(巴氏涂片)显示不典型鳞状细胞(ASC-US)或更糟。

		组织诊断>或=CIN2
		积极的	负	总计
罗氏公司 cobas 4800	积极的	74	185	259
	负	7	84	91
	总计	81	269	350

敏感性= 91.4%

特异性= 31.2%

相比之下，与阴道镜终点>或=CIN2相比，目前的Digene hc2检测的敏感性为97.5%(79/81)，特异性为27.1%(73/269)。

最后，将罗氏cobas HPV-16/18基因型检测结果与>或=CIN2的组织诊断结果进行比较。

表3。罗氏cobas 4800 HPV 16/18基因型检测与宫颈活检的比较，350份样本经细胞学(巴氏涂片)检测为ASC-US。

		组织诊断>或=CIN2*
		积极的	负	总计
罗氏公司 cobas 4800 16/18	积极的	42(一个)	36 (c)	78
	负	39 (b)	233	272
	总计	81	269	350

敏感性= 51.9%

特异性= 86.6%

通过GenProbe APTIMA检测，其中41例HPV mRNA阳性(非基因型)。

b.除16/18外，32份标本的HPV类型为罗氏阳性。33例也通过GenProbe APTIMA检测HPV阳性，未检测到其他特异性(NOS)。

c. 31例经GenProbe APTIMA检测HPV、NOS阳性。

参考范围:

从30岁及以上的细胞学(Pap)和HPV DNA检测人群中，检测从ThinPrep培养基中收集的用于常规HPV筛查的宫颈/宫颈(n=30)和阴道(n=28)样本。

58例宫颈/宫颈内和阴道标本中，58例(100%)巴氏阴性，Roche cobas HPV 4800阴性，Digene hc2阴性。

罗氏cobas HPV检测的参考范围为阴性。

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