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使用自动提取机从血液或骨髓样本中提取基因组DNA,并按照制造商的说明用于商业试剂盒GlobalFiler PCR Amplification kit。简单地说,利用荧光标记引物,在单一多重聚合酶链反应(PCR)中扩增出20个不同的短串联重复序列(STR)标记区域。在基因分析仪上使用毛细管电泳分析产品的大小和数量。对于任何患者的初始样本,该测试是在3个单独的DNA样本上进行的:供者生殖系DNA,受者生殖系DNA,和受者移植后样本用于嵌合检测。生殖系样本的STR谱被用来识别能够区分供体和受体的标记。根据这些概况,然后使用Thiede等人提出的假设和计算确定移植后样本中供体和受体DNA的百分比。用于嵌合评估的后续样本不需要与用于供体和受体生殖系评估的样本一起提供,因为初始测试的概况被保存在文件中用于比较。(包装说明书:GlobalFiler PCR扩增试剂盒。用户指南。应用生物系统公司;2019; Thiede C, Florek M, Bornhauser M, et al: Rapid quantification of mixed chimerism using multiplex amplification of short tandem repeat markers and fluorescence detection. Bone Marrow Transplant. 1999;23:1055-1060)
该分析在移植后标本(供体和受体DNA混合嵌合)中的敏感性约为5%。
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