测试ID: FLARP
自由生活的阿米巴，分子检测，PCR，变化

在罗氏MagNA Pure或西门子组织制备系统(TPS)上提取DNA后，在罗氏LightCycler (LC) 480 II仪器上进行检测。LC 480 II仪器是在每个聚合酶链反应(PCR)周期后对目标核酸(amplicon)的发展进行扩增和监测的自动化仪器。

该PCR检测的DNA靶点是一个编码核小亚基核糖体18S rRNA的基因。

PCR是作为两个单独的分析:引物和探针Acanthamoeba物种和内部控制将包括1个反应，而引物和探针Balamuthiamandrillaris和Naegleriafowleri含有第二反应。前向和反向引物用于模板扩增，Taqman探针（FAM和CY5）用于检测。FAM和CY5探针含有荧光团（5'-末端）和猝灭剂（3'-末端）紧密近;猝灭剂抑制来自荧光团的荧光信号，而探针完整。在探针退火到靶向AmeBa 18s rdNA之后，随后通过具有5'-3'进蛋核酶活性的DNA聚合酶降解，导致荧光团的释放和信号产生。通过存在扩增曲线确认特定生物核酸的存在，其用于确定样品是否为正或阴性。（QVARNSTROM Y，Visesvara GS，SRIRAM R，DA SILVA AJ：多重实时PCR测定同时检测Acanthamoebaspp。Balamuthia mandrillaris,Naegleria fowleri．临床微生物学杂志2006;44:3589-3595;Connelly L, Anijeet D, Alexander CL。持续性棘阿米巴角膜炎的描述病例:提高对这种复杂眼病的认识。2019年11月28日;2(3):acmi000084

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