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检测在罗氏LightCycler (LC) 480仪器上进行,然后在罗氏MagNA Pure上提取DNA。LC 480仪器在每个PCR周期后对目标核酸(amplicon)的发展进行扩增和监测。
此PCR检测的DNA靶点是一个编码甘油磷酸二酯磷酸二酯酶(glpQ基因特异性的包柔氏螺旋体在回归热组的物种。这种基因在包柔氏螺旋体导致莱姆病的物种
通过PCR扩增特定碱基对DNA靶序列。扩增子的检测基于荧光共振能量转移(FRET),该方法利用1个杂交探针与供体荧光体荧光素在3'端,另一个杂交探针与受体荧光体LC-Red 640在5'端。当目标放大器存在时,LC-Red 640在特定波长发出可测量和量化的光信号。通过对扩增子进行熔化温度分析,确定了特定生物体核酸的存在;在适当的温度范围内是否有熔化峰可用来确定样品是正的还是负的。real-time PCR在临床微生物实验室中的应用和挑战。在快速循环实时PCR中。由U Reischl, C Wittwer, F Cockerill编辑。施普林格,纽约,2002)
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