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ORTHO-HCV版本3.0 ELISA测试系统是一种三阶段测试,在涂有重组丙型肝炎病毒(HCV)抗原(c22-3、c200和NS5)组合的微孔中进行。在第一阶段,稀释的试样或适当的对照品在试验井中孵育指定的时间长度。如果样本中存在对3种抗原中的任何一种都有反应的抗体,则抗原-抗体复合物将在微孔表面形成。如果不存在抗-HCV,则不会形成复合物。在随后的洗涤步骤中,将去除未结合的血清蛋白质。在第二阶段,将与辣根过氧化物酶结合的鼠单克隆抗体添加到微孔中。结合物特异性结合抗原抗体复合物的人IgG部分。如果不存在抗原-抗体复合物,则通过后续清洗去除未结合的结合物。在第三阶段,向测试井中加入由邻苯二胺(OPD)和过氧化氢组成的酶检测系统。如果存在结合共轭物,OPD将被氧化,产生有色终产物。在这个反应中,过氧化物酶被过氧化氢二价氧化,形成一种中间化合物,而这种中间化合物又通过随后与氢离子供体OPD的相互作用而还原到初始状态。由此产生的OPD氧化形式为橙色。然后加入硫酸以停止反应。颜色强度取决于结合结合物的数量,是样本中抗-HCV浓度的函数。颜色强度用微孔读取器(光度计)测量,其设计用于测量微孔中的光吸收率(包装插页:丙型肝炎病毒编码抗原[重组c22-3、c200和NS5],正位HCV 3.0版ELISA检测系统。正交临床诊断;01/2017)
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