测试ID: HBRP
荚膜组织胞浆菌/芽生菌物种，分子检测，PCR，变化

快速检测荚膜组织胞浆菌和皮炎芽生菌DNA

有助于快速诊断组织胞浆菌病和芽孢菌病

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感染皮炎芽生菌和荚膜组织胞浆菌引起多种临床表现，从自限性、轻度肺部疾病到可能危及生命的弥散性疾病。弥散性疾病的危险患者包括新生儿和免疫抑制个体，特别是那些患有艾滋病、恶性血液病或最近移植的患者。原发感染是通过吸入环境中存在的小孢子获得的。在美国，大部分芽孢菌病和组织胞浆菌病发生在俄亥俄和密西西比河流域。

诊断芽生菌病和组织胞浆菌病的金标准仍然是培养中微生物的分离。虽然敏感，但培养的恢复和随后的鉴定可能需要几天到几周。在培养后，可以使用传统的宏观和微观形态学技术或核酸杂交探针进行鉴定。杂交探针为基础的程序是快速的，从培养显示良好的敏感性和特异性，尽管一些交叉反应相对罕见的真菌有机体已经报道。可用于这些微生物的额外诊断测试包括染色、组织病理学、血清学和抗原检测，每种方法都根据疾病的阶段和患者的状态提供优点和局限性。真菌染色(如钙氟白)是一种快速的诊断方法，但灵敏度和特异性较差。血清学检查如补体固定和免疫扩散是无创的，但是是费力的、主观的，并且可能显示低敏感性，特别是在免疫缺陷的宿主中。抗原检测也提供了一种非侵入性的方法，但已被证明与近缘真菌的抗原具有交叉反应性。

分子技术已被确立为诊断感染性疾病的敏感和特异性方法，并具有快速得出结果的额外优势。由于传统的芽孢菌病和组织胞浆菌病诊断方法的局限性，建立了单管实时荧光定量PCR检测方法，并进行了验证B皮炎/ gilchristii和H capsulatum直接从临床标本中提取。

不适用

一个积极的结果荚膜组织胞浆菌表明存在组织胞浆菌属DNA;一个积极的结果皮炎芽生菌/ gilchristii表明存在芽生菌DNA。

阴性结果表明没有检测到H capsulatum和B皮炎/ gilchristiiDNA。真菌培养提高了这种PCR检测的敏感性，当PCR为阴性时应始终进行。

这种快速PCR方法检测荚膜组织胞浆菌和皮炎芽生菌因此，不区分存在的活的、与疾病相关的生物体和以前治疗过的疾病遗留下来的核酸。检测结果应与患者症状和临床表现相关，然后作出明确诊断。

阴性结果也不能排除H capsulatum或B皮炎/ gilchristii因为该生物体的存在水平可能低于本试验的检测限度。

PCR检测支气管肺泡灌洗液(BAL)的敏感性低，阴性结果不排除感染。

分析灵敏度和特异性:

该分析方法的分析灵敏度被确定为小于或等于100拷贝/微升皮炎芽生菌/ gilchristii和荚膜组织胞浆菌．的B皮炎/ gilchristii熔体峰在670 nm处读取，熔体温度(Tm)为66℃+或- 0.26℃(平均值+或-标准差)H capsulatum美国国家生物技术信息中心(NCBI)的基本局部比对搜索工具(BLAST)可以搜索引物、探针和目标序列B皮炎/ gilchristii和H capsulatum没有产生任何潜在的交叉反应序列。此外，对临床实验室常见的179种可能发生交叉反应的微生物(包括细菌、真菌、寄生虫和病毒)进行的核酸检测表明，它们与其他生物体没有交叉反应。可根据要求提供生物体名单。

培养菌株的敏感性和特异性:

对分离菌株的敏感性分别为100%(61/61)和94.5% (51/54)B皮炎/ gilchristii和H capsulatum,分别。该方法对两种微生物的特异性为100%，因为在另一种非微生物中未检测到交叉反应B皮炎/ gilchristii或非H capsulatum文化评估。

直接来自标本的临床敏感性和特异性:

同时对797例临床标本进行真菌培养和实时荧光定量PCR检测，以评估临床敏感性和特异性。PCR检测方法的灵敏度和特异性B皮炎/ gilchristii阳性率分别为86%(12/14)和99.4%(778/783)。PCR检测的总体灵敏度和特异性H capsulatum分别为73.3%(11/15)和100%(782/782)。值得注意的是，恢复H capsulatum6例培养阳性中2例PCR阳性，均为假阴性。因此，不排除BAL液阴性结果H capsulatum来自该标本来源的低敏感性感染。

由于数量少,临床上尽管检测阳性标本近800个标本在一段1年,飙升的研究使用一个质粒控制对生物体也使用消极执行标本代表各种标本类型(30每个胸膜液、痰、平衡液、脑脊液、组织,骨骼,无菌的体液，尿液和血液)。加钉研究表明，PCR检测灵敏度为100%(30/30阳性)B皮炎/ gilchristii除血液外的所有标本类型(97%敏感;积极的29/30)。PCR检测灵敏度为100% (30/30)H capsulatum除痰和血外，所有加标标本的敏感性分别为98%和97%。

抑制作用研究:

总萃取率和扩增抑制率均小于1%(抑制2/330)。30份血样中有1份出现萃取抑制B皮炎/ gilchristii和H capsulatum， 60例痰标本中1例H capsulatum．

1.考夫曼CA:组织胞浆菌病。临床医学杂志2009;30:217-225

2.小麦LJ, Freifeld AG, Kleiman MB，等:组织胞浆菌病患者管理的临床实践指南:2007年由美国传染病学会更新。临床传染病杂志2007;45:807-825

3.Chapman SW, Bradsher RW Jr, Campbell GD Jr等:芽孢菌病患者管理的实践指南。美国传染病学会。临床感染疾病2000;30:679-683

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