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在样品处理之后,使用MANGA纯块(Roche施加的科学)提取核酸。然后使用光环克实时PCR平台(Roche施加的科学)将提取物转移到比色皿中进行扩增。LightCycler是一种自动仪器,其在PCR的每个循环后放大和监测靶核酸(扩增子)的发育。扩增子的检测是基于荧光共振能量转移(FRET),其利用杂交探针。通过进行扩增子的熔化曲线分析来确认特定生物核酸的存在。设计引物和褶皱杂交探针以靶向组氨酸激酶的174碱基对(BP)区域(DRK-1)基因B.Lastomyces Dermatitidis / Gilchristii和192-BP区域的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH.)基因组织血糖荚膜, 分别。接受者探测器B.Dermatitidis / Gilchristii.用Red-705染料标记,而受体探测器H Capsulatum.用Red-640染料标记。用2种不同的染料标记受体探针允许同时检测和分化B.Dermatitidis / Gilchristii.和H Capsulatum.在单个PCR测定中。(Babady Ne,Buckwalter SP,Hall L等:检测Blastomyces Dermatitidis.和组织血糖荚膜通过使用实时PCR从培养分离株和临床标本。J Clar Microbiol 2011; 49:3204-3208)
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