测试ID: BTKFP
布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)基因型和蛋白分析，全基因序列和流式细胞术，血液

有复发性肺感染、严重低γ球蛋白血症和外周血B细胞低于1%的男性x -连锁无球蛋白血症(XLA)诊断的首选检测

在女性中，这是识别XLA携带者最有用的测试。

通过包括蛋白质和基因分析，该测试提供了一个全面的评估，并使适当的基因型-表型相关性。

x -连锁无球蛋白血症(XLA)是一种体液性原发性免疫缺陷，大约每20万活产婴儿中就有1例男性受到影响。XLA是由布鲁顿酪氨酸激酶基因(BTK)，(1)导致骨髓内B细胞发育严重受阻，外周血中成熟B细胞显著减少或完全缺失。(2)大约85%的早期B细胞发育缺陷的男性患者患有XLA。(3)由于缺乏成熟B细胞，XLA患者血清中所有主要免疫球蛋白水平均显著降低，因此易受严重和反复的细菌感染。肺炎、中耳炎、肠炎和复发性窦肺感染是该病的主要临床诊断特征。感染性并发症的范围还包括肠病毒脑膜炎、脓毒性关节炎、蜂窝组织炎和脓胸等。该病主要表现为小于1岁的男童。

BTKXLA是唯一与XLA相关的基因，定位于x染色体Xq21.3-Xq22，由19个外显子组成，跨越37.5 kb基因组DNA。BTK编码Btk/Tec家族的一个非受体酪氨酸激酶。Bruton酪氨酸激酶(Btk)蛋白由5个结构域(PH, TH, SH3, SH2, TK)组成。引起XLA的变异已经在所有的领域被发现BTK以及基因的非编码区。错义变异占所有变异的40%，无义变异占17%，缺失变异占20%，插入变异占7%，剪接位点变异占16%。超过600种独特的变种BTK该基因已通过全基因测序检测到，并已列入BTKbase数据库BTK变异(http://bioinf.uta.fi/BTKbase).(5)基因型-表型相关性尚未完全确定BTK，但显然，无意义变异比替换多占4倍，这表明后者可能在不引起表型的情况下被容忍。基因变异的类型和位置明显影响临床表型的严重程度。有些变异表现在生命的第一年或两年，使早期诊断。(5) XLA的不同严重程度可以部分解释延迟诊断的原因，即使在存在相同变异的家庭中也是如此。虽然该疾病被认为是完全渗透的，但临床表型可根据特异性的性质而有相当大的差异BTK(5)该基因的Lyonization并不典型，迄今为止只有1例女性XLA病例是由于在携带的女性Lyonization歪斜。因此，临床特征与XLA相同的女性，当临床认为合适时，应评估常染色体隐性无球蛋白血症(6)，如果父亲一方感染XLA，则应评估XLA。

一个流式细胞仪检测细胞内对单核细胞中使用一个杀人案anti-Btk单克隆抗体是由Futatani et al,用来评估XLA患者和携带者。(7)在这项研究中,41 XLA无关的家庭进行了研究,缺乏对蛋白表达杀人案被40 41的病人,完全Btk缺失35例，部分Btk缺失5例。1例患者Btk蛋白表达正常。Btk部分表达或正常表达的6例患者均有错义BTK变体。此外，流式细胞仪检测了41例患者中35例(约85%)的母亲的携带状态。在6例XLA患者母亲Btk表达正常的患者中，我们注意到这些患者均为散发病例，既往无家族病史(7)。

因此，似乎大多数BTK变异体导致Btk蛋白表达缺陷，可通过单核细胞流式细胞术检测(7,8)。(8)流式细胞仪检测为诊断XLA提供了一种方便的筛查工具，通过流式细胞仪对诊断进行确认BTK(7,8)在罕见的具有XLA临床特征但Btk蛋白表达正常的患者中，BTK必须进行基因分型以确定变异的存在。

在男性患者中，应怀疑XLA的诊断:1)早发性细菌感染，2)各种血清免疫球蛋白明显减少，3)缺乏B细胞(CD19+细胞)。外周B细胞数量的减少是一个关键特征，尽管这也可以在一小部分常见可变免疫缺陷(CVID)患者中看到。同样的,一些人BTK变异可以保存少量的循环B细胞，因此，上述3个标准都需要进行评估。患者应通过流式细胞术检测Btk蛋白的存在，尽管流式细胞术的正常结果不排除存在aBTK具有异常蛋白功能的变体(尽管蛋白表达正常)。这种诊断只有在那些在BTK或家族男性成员患有低球蛋白血症，B细胞缺失或低B细胞者。需要适当的临床病史，无论是否通过流式细胞术检测到异常Btk蛋白。

流式细胞术显示XLA患者的母亲Btk蛋白表达正常，且正常BTK基因分型，病人的变异是母体生殖系的新生变异的结果。在相同的研究中,结果表明,可以有女性携带者有正常的对蛋白表达,但基因杂合的杀人案,他们不显示异常蛋白表达由于极端的x染色体的失活突变体倾斜。(6),1份正常的存在BTK基因和相关的正常Btk蛋白可以稳定突变蛋白，消除在女性携带者中看到的典型的双峰蛋白表达模式。因此，只有通过基因检测，尤其是Btk蛋白流动检测正常时，才能最终确定女性携带者的状态。

重要的是要记住，仅仅是存在BTK基因变异不一定与XLA诊断相关，除非有适当的临床和免疫学特征(9,10)。

BTKSP:将提供一份解释性报告。

BTK:布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)表达将被报道为存在、缺失、部分缺失或镶嵌(载体)。

提供患者特异性解释报告。

一些x -连锁无球蛋白血症(XLA)患者的B细胞可能高于1%，但仍低于年龄参考值，而且免疫球蛋白最初可能较低或正常。如有家族史、年龄、临床及免疫学史怀疑有XLA，可进行检查。

在6周内接受过异体输血或接受过异体血液或骨髓移植的患者，由于捐献者的DNA存在，基因检测结果可能会不准确。

罕见变异可能导致假阴性或假阳性结果。如果获得的结果与临床结果不一致，则应考虑进行额外的检测。在诊断或提供给实验室的系谱中的任何错误都可能导致对结果的错误解释。

这种方法不会检测发生在基因的内含子(外显子-内含子边界以外)和调控区域的变异或大型重排型变异(这可能导致假阴性结果)。

Btk蛋白和基因检测不适用于接受激酶抑制剂治疗的血液学肿瘤患者，包括但不限于选择性Btk抑制剂Ibrutonib。这项检测仅用于评估由布鲁顿酪氨酸激酶基因的种系变异引起的疑似单基因原发性免疫缺陷、x连锁无球蛋白血症患者。

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10.Fleisher TA，公证angelo LD:怎样才能称之为致病性突变呢?中国Immunol 128:285 2008; 286年

• 布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)基因型患者信息