测试ID: BTKFP
布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)基因型和蛋白分析，全基因序列和流式细胞术，血液

基因组DNA首先从全血中提取，然后BTK基因扩增。PCR产物由非结合引物和核苷酸经酶切纯化后，利用测序引物和荧光染料终止化学方法进行双向测序。测序产品在自动测序仪上分离，跟踪文件使用专门的变异检测软件和目视检查，分析所有19个外显子的外显子和内含子/外显子边界的变异。(未发表的梅奥法)

用全血样本进行布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)蛋白表达的流式细胞术检测。用抗人CD20 (B细胞)和CD14(单核细胞)抗体对血液中的细胞进行染色，然后裂解RBC(使用预先制备的裂解缓冲液)，细胞固定和渗透以制备抗人Btk抗体的细胞膜。在渗透步骤之后，使用BD生物科学公司的抗人Btk荧光预偶联抗体对细胞内Btk进行染色。染色和洗涤后，在检测的最后一步，将细胞重悬在500 mcL BD FACS染色缓冲液中，采用多参数流式细胞仪分析样品。(未发表的梅奥法;Futatani T, miyaaki T, Tsukada S，等:通过流式细胞仪分析评估x -连锁无球蛋白血症单核细胞中Bruton酪氨酸激酶的缺陷表达及其在载体检测中的临床应用。血1998;91 [2]:595 - 602)

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