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本分析采用T-REx系统(Thermo Fisher)。在没有四环素或强力霉素的情况下,甘氨酸受体α -1亚基的表达受到抑制;在四环素或强力霉素的情况下,甘氨酸受体α -1亚基的表达受到诱导。(Yao F, Svensjo T, Winkler T, Eriksson C, Eriksson E:四环素抑制因子tetR,而不是四甲基哺乳动物细胞转录因子融合衍生物,调节哺乳动物细胞的诱导基因表达。Hum Gene Ther. 1998年9月;9[13]:1939-1950)
HEK293细胞稳定地表达四环素抑制因子,并在强力霉素的控制下,稳定地转染了编码甘氨酸受体α -1亚基的质粒。在测定前24小时,玻片下半部分的孔用含强力霉素的培养基处理。24小时后,将患者脑脊液和/或血清加入冰冻的活HEK293细胞中。结合的IgG将使用荧光团结合的抗人IgG二抗检测。具有甘氨酸受体特异性IgG的患者样本在强力霉素处理过的细胞上呈阳性,而在未处理过强力霉素的细胞上呈阴性。(未发表的梅奥法)
周四