测试ID: HPFRP
幽门螺杆菌克拉霉素耐药预测，分子检测，PCR，粪便

粪便样本(约50-100毫克)放入50% STAR缓冲液中，使用Mayo Microlab Maxwell HT粪便DNA纯化试剂盒在Hamilton Microlab STAR设备上提取。聚合酶链反应(PCR)检测采用靶特异性检测系统，包括引物、TaqMan检测探针和SimpleProbe，用于基于熔体曲线分析的基因分型，靶向23S核糖体RNA基因。LightCycler 480 II仪器在PCR循环过程中通过荧光对目标核酸序列进行扩增和监测。扩增产物的检测是基于TaqMan探针原理。对于PCR产物检测，TaqMan探针与扩增靶的互补链结合。具有5'-3'核酸外切酶活性的特异性PCR Taq聚合酶降解探针，释放荧光团，打破与猝灭分子的接近，使荧光团产生荧光。PCR循环结束时，扩增产物进行热变性，然后冷却，使荧光素标记的SimpleProbe退火到扩增靶点的18碱基对区域，其中包括已知具有克拉霉素耐药性的2个位置突变。温度缓慢升高，同时持续监测荧光。整个过程在一个封闭的系统中完成，以减少污染。此外，污染控制是通过UNG酶处理和包含dUTPs的主混合来实现的。(Chen D, Cunningham SA, Cole NC, Kohner PC, Mandrekar JN, Patel R: Phenotypic and molecular antimicrobial susceptibility of幽门螺杆菌．抗微生物药物化学。2017年3月24日;61(4):e02530-16。doi: 10.1128 / AAC.02530-16)

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