测试ID: HPCRP
幽门螺杆菌克拉霉素耐药预测，分子检测，PCR，各不相同

活菌和非活菌的临床分离菌被转移到一个1 mcL的充满分离菌的回路中，进入棉签中和缓冲液(NB)管进行热/物理裂解，然后在测试前以1:100稀释。PCR检测采用靶特异性检测系统，包括引物、TaqMan检测探针和SimpleProbe，用于基于熔体曲线分析的基因分型，靶向23S核糖体RNA基因。LightCycler 480 II仪器在PCR循环过程中通过荧光对目标核酸序列进行扩增和监测。扩增产物的检测是基于TaqMan探针原理。对于PCR产物检测，TaqMan探针与扩增靶的互补链结合。具有5 ' -3 '核酸外切酶活性的特异性PCR Taq聚合酶降解探针，释放荧光团并打破其与猝灭分子的接近，允许荧光团的荧光。PCR循环结束时，扩增产物热变性，然后冷却，允许荧光素标记的SimpleProbe退火到扩增靶区的18碱基对区域，其中包括与克拉霉素耐药相关的2个位置突变。温度缓慢升高，同时持续监测荧光。整个过程在一个封闭的系统中完成，以减少污染。此外，污染控制是通过UNG酶处理和包含dUTPs的主混合来实现的。Chen D, Cunningham SA, Cole N, et al .:表型和分子抗菌素敏感性幽门螺杆菌在美国。Antimicrob Agents Chemother 2016;61:e02530-16)

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