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从样本中提取基因组DNA。
以下基因的基因分型使用基于聚合酶链反应(PCR)的5'-核酸酶分析。荧光标记的检测探针对目标DNA退火:ANKK1,ADRA2、CHRNA3、COMT、CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4、CYP3A5、DRD2、EPHX1、GRIK4、HTR2A、HTR2C、MTHFR、OPRM1、SCN1A、,和UGT2B15。PCR用于扩增含有变异基因的DNA片段。如果检测探针与目标DNA完全匹配,5'-核酸酶聚合酶降解探针,报告染料从猝灭染料的影响中释放出来,并检测到荧光信号。基因型是根据检测到的等位基因特异性荧光信号来分配的。使用手册:TaqMan SNP基因分型分析用户指南。应用生物系统公司;修订格01/2014)
放大的HLA-B * 15:02和于* 31:01SYBR Green与双链DNA结合时会发出荧光。根据检测到的等位基因特异性SYBR绿色荧光信号分配基因型。(未发表的梅奥法)
SLC6A4利用PCR扩增多态性周围区域,然后对产物进行大小分离。(Lesch KP, Bengel D, Heils A, et al:焦虑相关特征与血清素转运体基因调节区多态性的关联。科学。1996年11月,274 [5292]:1527 - 1531)
CYP2D6拷贝数检测:
该分析利用双重实时PCR,包括1个拷贝数探针和每个反应的参考分析。每个拷贝数探针检测感兴趣的基因组序列,参考分析检测二倍体基因组中已知存在2个拷贝的序列。相对定量用于确定每个探针的基因组DNA(gDNA)样本中目标的相对拷贝数,标准化为10 ng/mcL。将每个探针标准化为参考序列的已知拷贝数,并将其与校准品样品进行比较,校准品样品中包含每次运行的目标序列的已知拷贝数。(包装插页:Taqman拷贝数分析。Applied Biosystems;版本B)
2D6测序分析(第2层,根据需要):
的CYP2D6通过PCR扩增感兴趣的等位基因。PCR产物然后用荧光染料终结者化学方法纯化并在两个方向进行测序。测序产品在自动测序仪上分离,跟踪文件使用突变检测软件和目视检查分析所有9个外显子的外显子和内含子/外显子边界的变化。(未发表的梅奥法)
周一到周四