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利用自动MagNA Pure珠状系统(Roche Molecular Systems)从EDTA全血中提取核酸。然后将萃取物转移到独立的毛细管试管中进行扩增。LightCycler是一种自动仪器,在每次PCR循环后扩增和监测目标核酸(amplicon)的发展。
PCR检测的DNA靶点是一个编码核小亚基核糖体RNA (SS-rDNA)的基因。本实验由2条正向引物、1条反向引物和2条探针组成,均为特异性引物巴贝西虫目标物种的DNA。首先利用靶特异引物进行PCR扩增,得到特异性碱基对DNA靶序列。然后,在熔化曲线分析中使用荧光共振能量转移(FRET)探针检测Amplicon,该探针使用一个杂交探针与供体荧光团,荧光素,在3'端和第二个杂交探针与受体荧光团,LC-Red 640,在5'端。荧光产生时,两个探针退火到目标序列在彼此接近。然后LC-Red 640在特定波长发出可测量和量化的光信号。(Burgess MJ, Rosenbaum ER, Pritt BS, et al.)可能Transfusion-Transmitted巴贝西虫divergens -就像阿肯色州病人的/MO-1。临床感染Dis 2017;补充数据)
星期一到星期六;不同