测试ID:争论不休
己糖胺酶A和总己糖胺酶，血清

己糖苷酶是溶酶体中活性较高的酶之一，它能水解- d -的衍生物N乙酰氨基葡萄糖和βd -N-acetylgalactosamine。天然底物是某些鞘脂(即GM2)，其中乙酰半乳糖胺是末端单糖。两种己糖苷酶同工酶A和B的电泳迁移率和热稳定性不同。己糖胺酶A向阳极移动，热不稳定，而己糖胺酶B向阴极移动，热稳定。

该过程使用自动移液站和分光光度计进行。底物为4-甲基伞形酰基-N-乙酰- β -d -葡萄糖苷(4- muf -acetyl-beta-D-glucopyranoside, 4- muf - acetamino -2-deoxy-beta- d -glucopyranoside)。

将样品与柠檬酸磷酸盐缓冲液混合，并将混合物分成两管。一根试管保持在环境温度下，另一根试管在51.5摄氏度下加热15分钟。在自动移液站，样品和底物被移液到位于37℃水浴中的微量滴定试管中。在加热的样品中，己糖胺酶A部分被破坏，只留下己糖胺酶B与底物反应。未加热的样品提供总己糖苷酶(A和B)。30分钟孵育后与甘氨酸停止反应。样品强度与4-甲基伞形花序酮标准曲线比较，以定量总和B馏分。根据这些结果计算被加热灭活的A组分的百分比。热失活的差异被用来分离己糖苷酶的活性。(O'Brien JF, Burtis CA, Ashwood ER:溶酶体储存疾病。见:Tietz临床化学教科书第二版，WB Saunders公司;1994:2149 - 2160; Cowan T, Pasquali M: Laboratory investigations of inborn errors of metabolism. In: Sarafoglou K, Hoffman GF, Roth KD, eds. Pediatric Endocrinology and Inborn Errors of Metabolism. 2nd ed. McGraw-Hill; 2017:1139-1158)

周四