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T、B和自然杀伤(NK)细胞表面标记试验使用单克隆抗体来识别各种膜抗原,并用流式细胞术计数表达这些分化抗原的细胞数量。CD14用于排除单核细胞,从而提高淋巴细胞群的准确性和纯度。报告的结果是每毫升血液中淋巴细胞总T细胞(CD3+)、CD3+CD4+ T细胞、CD3+CD8+ T细胞、自然杀伤细胞(CD16+56+、CD3-)和b淋巴细胞(CD19+)的百分比,以及每种细胞类型的绝对数量。该分析是一个七色免洗程序和绝对计数是从内部珠标准计算。此外,还报道了总淋巴细胞计数和CD4:CD8比值。(Hoffman RA, Kung PC, Hansen WP, Goedstien G:外周血中人类T淋巴细胞及其亚类的简单和快速测量。中国科学院院刊,1980:77:4914-4917;美国卫生与公众服务部:人类免疫缺陷病毒感染患者CD4+ t细胞检测的指导方针MMWR Morb Mortal Wkly Rep, 1997年;RR-2页1至29)。
B细胞亚群,血液:
使用Ficoll梯度从全血中分离外周血单个核细胞(PBMC),并用于染色方案。该检测包括多色5管面板,用于检测以下抗体:CD45、CD19、CD20、CD27、IgD、IgM、CD38和CD21。特异性抗体染色后,用多聚甲醛清洗并固定细胞,然后在Becton Dickinson FACS Canto仪上进行流式细胞仪分析。细胞表面的表达被表示为CD19+ B细胞表达每一种特定标记物的百分比。CD19+和CD20+ B细胞以淋巴细胞总数(CD45+)的百分比表达。b细胞亚群的绝对计数来自全血的流式细胞术分析,使用单克隆抗体识别CD45、CD3、CD4、CD8、CD19和CD16+CD56+。CD14用于排除单核细胞,从而提高淋巴细胞群的准确性和纯度。该分析是一个7色,溶解-不洗涤程序和绝对计数是从内部珠标准计算。每微升绝对淋巴细胞计数用于计算本试验中各种b细胞亚群的绝对计数(未发表的Mayo方法)。
常见可变免疫缺陷确认流程
外周血单个核细胞被分离并用CD19、跨膜激活剂、钙调剂和亲环素配体(CAML)相互作用剂(TACI)和b细胞激活因子受体(baffr)进行染色,每一个都与荧光色素结合。用特异性抗体染色后,清洗细胞,用多聚甲醛固定,然后在Becton Dickinson FACS Canto仪上进行流式细胞仪分析。细胞表面表达量为CD19+ B细胞表达TACI和baffr的百分数。(未发表的梅奥法)
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