测试ID:HAEV1
溶血性贫血评估，血液

血红蛋白电泳：

毛细管系统是一个自动化系统，使用毛细管电泳在碱性缓冲液中通过电泳流动性分离带电分子。根据电解质pH值和电渗流量进行分离。通过抽吸注入样品稀释液。高压蛋白质分离ccurs和血红蛋白蛋白质组分的直接检测是在415nm处，这是血红蛋白特有的。产生的电泳图峰值用于评估模式异常，并量化为存在的总血红蛋白的百分比。常见血红蛋白组分的位置示例为，从阴极到阳极：Hb A2，C，A2/O-Arab，E，S，D，G-Philadelphia，F，A，Hope，Bart，J，N-Baltimore和H.（Louahabi A，Philippe M，Lali S，Wallemacq P，Maisin D:分析毛细血管系统血红蛋白组分和变体的新Sebia试剂盒的评估.《临床化学实验室医学》2006；44[3]：340-345；使用手册：毛细血管血红蛋白（E）使用毛细管2弯曲穿刺仪。Sebia；2014年6月）

高效液相色谱血红蛋白变体:

使用高效液相色谱法（HPLC）将全血溶血液注入通过阳离子交换柱的分析流中。预编程梯度控制也通过分析盒的洗脱缓冲液混合物。通过增加第二缓冲液的百分比来提高洗脱缓冲液的离子强度。随着缓冲液离子强度的增加，从药筒中洗脱出的血红蛋白越强。吸光度变化由双波长滤光光度计检测。吸光度的变化显示为吸光度随时间变化的色谱图。（Huismann TH，Scroeder WA，Brodie AN，et al:血红蛋白的微色谱。III.血红蛋白测定的简化程序A2.实验室临床医学杂志，1975；86:700-702；欧CN，Buffone GJ，Reimer GL，Alpert AJ:新型阳离子交换剂上人类血红蛋白的高效液相色谱法。J Chromogr.1983；266:197-205；instruc更新手册：Bio-Rad变体IIβ-地中海贫血使用简短程序说明，L70203705。Bio-Rad Laboratories，Inc；2011年11月）

不稳定血红蛋白：

进行两种不同的血红蛋白稳定性测试：异丙醇和热稳定性。

不稳定的血红蛋白会在异丙醇稀溶液中沉淀。洗过的红细胞经离心使其溶血并清除。异丙醇是补充道。将溶血液在37℃下孵育20分钟，并检查浊度。正常血红蛋白无浑浊。(Fairbanks VF, Klee GG:血液学的生化方面。在:Burtis CA, Ashwood ER, eds。Tietz临床化学教科书。第三版。WB Saunders公司;1999:1685 - 1687;格林DN，沃恩CP, Crews BO，阿加瓦尔AM:血红蛋白病检测的进展。 Clinica Chimica Acta. 2015;439:50-57)

不稳定的血红蛋白也可通过加热至50℃沉淀。洗涤后的红细胞通过离心进行溶血和清除。溶血液在50℃下培养90分钟并检查浊度。正常血红蛋白无浊度。

渗透脆性：

红细胞渗透脆性试验的样本用EDTA抗凝。使用0.50 g/dL的氯化钠（NaCl）溶液进行渗透溶解。在37℃下以以下NaCl浓度（0.60、0.65和0.75 g/dL）孵育24小时后，进行孵育脆性试验。报告和解释结果。（Larson CJ，Scheidt R，Fairbanks VF：遗传性球形红细胞增多症的渗透脆性试验：使用EDTA抗凝血液在4℃下储存96小时。Am Soc临床病理会议摘要，1988；Larson CJ，Scheidt R，Fairbanks VF：遗传性球形红细胞增多症的渗透脆性试验：试验解释的客观标准。Am Soc临床病理学会议摘要，1988；；金·梅杰，扎内拉A：遗传性红细胞膜疾病和实验室诊断测试。国际实验室血液学杂志，2013；35:237-243）。

带3/曙红-5-马来酰亚胺结合试验：

曙红-5-马来酰亚胺（EMA）是一种荧光染料，可与带3蛋白细胞外环的Lys-430结合。使用单色流式细胞术方法（与荧光相对标绘的事件数），评估EMA染色红细胞的荧光强度，并与正常值患者进行比较。（King MJ，Behrens J，Rogers C，Flynn C，Greenwood D，Chambers K：诊断膜细胞骨架相关溶血性贫血的快速流式细胞术试验。Br J Haematol.2000；111:924-933；King MJ，Zanella A:遗传性红细胞膜疾病和实验室诊断试验。国际实验室血液学杂志2013；35:237-243）。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶：

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)在溶血液中催化葡萄糖-6-磷酸氧化为6-磷酸葡萄糖酸盐。同时，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP[+])被改变为它的还原形式(NADPH)，反应在自动化学分析仪上用分光光度法测量。Beutler E:红细胞代谢:生化方法手册第3版Grune and Stratton: 1984:68-71;van Solinge WW, van Wijk:血红细胞的酶。见:Rifai N, Horvath AR, Wittwer CT: eds。Tietz临床化学和分子诊断教科书。第6版Elsevier;2018: 30)章

丙酮酸激酶：

丙酮酸激酶通过将磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）转化为丙酮酸来催化二磷酸腺苷（ADP）磷酸化为三磷酸腺苷（ATP）。通过添加乳酸脱氢酶和还原烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）来量化形成的丙酮酸量以及在自动化学分析仪上将NADH氧化为NAD（+）时，在340nm处通过分光光度法测量吸光度的降低速率。（Beutler E：红细胞代谢。生化方法手册。第三版。Grune和Stratton；1984:68-71；van Solinge WW，van Wijk：红细胞的酶。载于：Rifai N，Horvath AR，Wittwer CT：编辑：Tietz临床化学和分子诊断教科书。第六版。Elsevier；2018年：第30章）

葡萄糖磷酸异构酶：

葡萄糖磷酸异构酶（GPI）将葡萄糖-6-磷酸（G6P）和果糖-6-P（F6P）相互转化。在本试验中，F6P通过G6PD反应进一步转化为6-磷酸葡萄糖酸盐（6-PG），导致NADP（+）还原为NADPH通过自动化学分析仪上340 nm处吸光度的增加进行分光光度测量。（Beutler E：红细胞代谢：生化方法手册，第3版，Grune和Stratton；1984:40-42；van Solinge WW，van Wijk：红细胞的酶。载于：Rifai N，Horvath AR，Wittwer CT:eds.Tietz临床化学和分子诊断教科书。第6版，Elsevier；2018年：第30章）

己糖激酶：

己糖激酶催化ATP和葡萄糖反应生成G6P和ADP。在本实验中，葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)的形成是通过G6PD反应将其进一步氧化至6-PG并还原NADP(+)来测定的。当NADP(+)被还原为NADPH时，在自动化学分析仪上在340 nm处用分光光度法测量吸光度的增加。Beutler E:红细胞代谢:生化方法手册第3版Grune和Stratton;1984:38-40;van Solinge WW, van Wijk:血红细胞的酶。见:Rifai N, Horvath AR, Wittwer CT: eds。Tietz临床化学和分子诊断教科书。第6版Elsevier;2018: 30)章

腺苷酸激酶：

腺苷酸激酶（肌激酶）催化ADP歧化为腺苷-5'-单磷酸（AMP）和ATP。在本试验中，通过跟踪ADP与丙酮酸激酶（PK）和乳酸脱氢酶（LDH）的形成，测量反向反应，导致NADH氧化为NAD（+）.通过自动化学分析仪在340nm处用分光光度法测量NADH氧化时出现的吸光度降低。（Beutler E：红细胞代谢：生化方法手册，第三版，Grune和Stratton；1984:93-95；van Solinge WW，van Wijk：红细胞的酶。载于：Rifai N，Horvath AR，Wittwer CT：编辑：Tietz临床化学和分子诊断教科书。第六版，Elsevier；2018年：第30章）

磷酸果糖激酶：

磷酸果糖激酶(PFK)催化F6P通过ATP磷酸化为果糖-1,6-二磷酸(FDP)。FDP通过醛缩酶和三磷酸异构酶(TPI)催化反应转化为二羟基丙酮磷酸(DHAP)。DHAP的形成速率是通过α -甘油磷酸脱氢酶将其还原为α -甘油磷酸，从而导致NADH氧化为NAD(+)。当NADH在自动化学分析仪上被氧化时，用分光光度法测量在340 nm处的吸光度下降。Beutler E:红细胞代谢:生化方法手册第3版Grune和Stratton;1984:68 - 71;van Solinge WW, van Wijk:血红细胞的酶。见:Rifai N, Horvath AR, Wittwer CT: eds。Tietz临床化学和分子诊断教科书。第6版Elsevier;2018: 30)章

磷酸甘油酸酯激酶:

磷酸甘油酸激酶（PGK）通过将1,3-二磷酸甘油酯（1,3-DPG）转化为3-磷酸甘油酸（3-PGA）催化ADP磷酸化为ATP。在本试验中，反应以相反方向进行。然后通过甘油醛磷酸脱氢酶（GAPD）测定1,3-DPG的形成作为1,3-DPG的反应转化为甘油醛-3-磷酸（GAP），导致NADH氧化为NAD（+）。在自动化学分析仪上以340nm分光光度法测量NADH氧化时发生的吸光度降低。（Beutler E:红细胞代谢：生化方法手册，第3版，Grune and Stratton；1984:53-55；van Solinge WW，van Wijk:红细胞的酶。载于：Rifai N，Horvath AR，Wittwer CT:eds.Tietz临床化学和分子诊断教科书。第6版，Elsevier；2018年：第30章）

Triosephosphate异构酶:

TPI将甘油醛-3-P（GAP）和DHAP相互转化。通过α-甘油磷酸脱氢酶将DHAP进一步转化为α-甘油磷酸酯，从而将NADH氧化为NAD（+），从而测量DHAP的形成速率.NADH的氧化通过自动化学分析仪上340 nm处吸光度的降低进行分光光度测量。（Beutler E：《红细胞代谢：生化方法手册》，第三版，Grune和Stratton；1984；van Solinge WW，van Wijk：红细胞的酶。载：Rifai N，Horvath AR，Wittwer CT:eds.Tietz临床化学和分子诊断教科书。第六版。Elsevier；2018：第30章）

谷胱甘肽：

事实上，红细胞中所有的非蛋白巯基都以还原型谷胱甘肽（GSH）的形式存在。5,5'-二硫双歧（2-硝基苯甲酸）是一种二硫化物化合物，很容易被巯基化合物还原，形成一种高颜色的黄色阴离子。通过412 nm测量所得黄色物质的吸光度，并与已知标准的吸光度进行比较。（Beutler E:红细胞代谢：生化方法手册；第三版Grune和Stratton:1984；Alisik M，Neselioglu S，Erel O:测量红细胞中氧化、还原和总谷胱甘肽水平的比色法，J Lab Med.2019:43（5），269-277。doi:10.1515/labmed-2019-0098）

嘧啶5'核苷酸酶：

嘧啶核苷酸的光谱吸收曲线明显不同于（通常存在）的光谱吸收曲线腺嘌呤核苷酸，如三磷酸腺苷。前者在约270 nm处有一个峰值，后者在约257 nm处有一个峰值。因此，可以通过证明红细胞提取物中270 nm的极高光谱吸收最大值来确定嘧啶5'核苷酸酶缺乏症。（Beutler E：红细胞代谢：生化方法手册，第3版，Grune和Stratton；1984:100-102；van Solinge WW，van Wijk：红细胞的酶。载于：Rifai N，Horvath AR，Wittwer CT:eds.Tietz临床化学和分子诊断教科书。第6版，Elsevier；2018年：第30章）

形态学回顾：

血液病理学家是这些疾病的专家评估幻灯片和解释报告发布。

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